飼糧添加益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能、腸道菌群和腸道形態(tài)的影響
豬腸道微生態(tài)區(qū)系由復(fù)雜多樣的微生物組成，腸道菌群的種類及數(shù)量變化直接影響豬的健康和生理功能。豬腸道有益菌群一旦遭到破壞，會(huì)使豬腸道消化吸收功能受損，降低生產(chǎn)性能。目前，主要有兩種調(diào)節(jié)豬腸道菌群的方法：益生菌和益生元。
研究表明，飼料中添加益生菌可顯著增加腸道有益菌的種類和數(shù)量，改善腸道功能，提高生長(zhǎng)豬的免疫力和日增重及飼料轉(zhuǎn)化率（張慧等，2017；秦紅，2016；胡曉芬等，2014；布登付等，2014；嚴(yán)念東等，2010）。益生元可被選擇性發(fā)酵而專一性地改善腸道中有益于宿主健康的菌群組成和活性（Roberfroid等，1998）。研究表明，飼糧中添加益生元可以提高生長(zhǎng)豬腸道有益菌數(shù)量，降低有害菌數(shù)量，提高豬的生產(chǎn)性能（蘇成文等，2016；秦?zé)樫懀?007；Shim等，2005）。然而，飼糧中同時(shí)添加益生菌和益生元對(duì)育肥豬的生產(chǎn)性能的影響研究較少。
因此，本試驗(yàn)以育肥豬為研究對(duì)象，探討飼糧中單獨(dú)添加復(fù)合益生菌、低聚果糖和同時(shí)添加復(fù)合益生菌及低聚果糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能、腸道菌群、腸道形態(tài)的影響，以期為育肥豬飼喂實(shí)踐中應(yīng)用益生菌和低聚果糖提供理論依據(jù)。
1腸材料與方法
1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)
選擇體重（[ 62.50±0.83]kg）基本一致的60 頭杜× 長(zhǎng)× 大三元雜交商品豬，隨機(jī)分為4 組，每組15 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 頭豬。對(duì)照組飼喂玉米- 豆粕型基礎(chǔ)飼糧（不添加抗生素、益生菌和低聚果糖），試驗(yàn)Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.4% 復(fù)合益生菌、試驗(yàn)Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.3% 低聚果糖、試驗(yàn)Ⅲ組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.3%低聚果糖+0.4% 復(fù)合益生菌。試驗(yàn)期為60 d。
1.2 試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理
各組基礎(chǔ)飼糧以玉米、豆粕為主要原料，參照NRC（2012）豬營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制成全價(jià)粉料，飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。
試驗(yàn)豬的飼養(yǎng)管理按照豬場(chǎng)規(guī)定進(jìn)行。豬只預(yù)飼6 d，待采食量恢復(fù)正常后進(jìn)入正試期，各組分別飼喂相應(yīng)飼糧。豬只自由采食和自由飲水。
1.3 樣品采集
試驗(yàn)結(jié)束前一天晚上豬只禁食、禁水。取樣當(dāng)天，從各組隨機(jī)挑選6 只體況基本均勻一致的豬只，肌注4% 戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉。頸動(dòng)脈放血處死后，迅速打開(kāi)腹腔，分別在十二指腸、空腸和回腸部位剪取5 cm 長(zhǎng)的腸段，用載玻片輕輕刮取5 g 左右食糜放入離心管中，置于-20 ℃保存，用于測(cè)定腸道食糜微生物含量。在十二指腸、空腸和回腸，分別剪取1 cm 的腸段，放入10% 的福爾馬林溶液中固定，用以制作石蠟切片分析腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。
1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法
1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定
試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，于早上8 ：00 逐只稱重空腹豬只體重，分別作為試驗(yàn)豬只的初始體重和結(jié)束體重。試驗(yàn)期內(nèi)每天準(zhǔn)確記錄各組每頭豬的采食量，以重復(fù)為單位，計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料肉比（F/G）。
1.4.2 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)測(cè)定
將用福爾馬林溶液固定的十二指腸、空腸、回腸取出，經(jīng)石蠟包埋后，切成5 μm 切片，蘇木精- 伊紅（HE）染色，采用非連續(xù)切片，切取2 張切片，在每張切片選取10個(gè)典型視野，光學(xué)顯微鏡拍照，用Image-Pro Plus6.0 軟件測(cè)定相應(yīng)的絨毛高度（腸腺開(kāi)口到絨毛頂端的垂直高度）及隱窩深度（絨毛根部上皮凹陷到固有層的長(zhǎng)度），并計(jì)算絨毛高度/ 隱窩深度比值。
1.4.3 腸道菌群測(cè)定
取稀釋液將腸道食糜進(jìn)行10 倍的配比稀釋。大腸桿菌、乳酸菌和雙歧桿菌分別以伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、LBS 培養(yǎng)基和BBL培養(yǎng)基在37 ℃條件下培養(yǎng)48 h 后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。具體測(cè)定步驟參照文獻(xiàn)的方法進(jìn)行（周映華等，2015 ；Torrallardona 等，2003）。所有微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以對(duì)數(shù)形式表示。
1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理
使用SAS 9.2 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）。若各組間比較差異顯著，以Duncan’s 法進(jìn)行組間多重比較，結(jié)果以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示（Mean±SD），以P ＜ 0.05 表示差異顯著。
2結(jié) 果
2.1 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能的影響
由表2可以看出，飼糧中單獨(dú)添加復(fù)合益生菌或者低聚果糖或者同時(shí)添加益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬的結(jié)束體重、ADFI、ADG和F/G均具有顯著影響（P<0.05），試驗(yàn)Ⅰ組育肥豬的生長(zhǎng)性能與試驗(yàn)Ⅱ組相比，差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組育肥豬的結(jié)束體重、ADFI、ADG分別比對(duì)照組顯著提高5.67%、2.81%和13.58%（P<0.05），F(xiàn)/G比對(duì)照組顯著降低10.48%（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組育肥豬的結(jié)束體重、ADFI、ADG分別比對(duì)照組顯著提高6.83%、2.80%和16.05%（P<0.05），F(xiàn)/G比對(duì)照組顯著降低12.78%（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅲ組育肥豬的結(jié)束體重、ADFI、ADG分別比對(duì)照組顯著提高13.60%、8.07%、30.86%（P<0.05），F(xiàn)/G比對(duì)照組顯著降低20.40%（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組育肥豬的結(jié)束體重、ADFI、ADG和F/G與試驗(yàn)Ⅲ組相比，差異不顯著（P>0.05）。
2.2 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響
復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響見(jiàn)圖1所示。由圖1-A可以看出，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組育肥豬的十二指腸和回腸絨毛高度與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組育肥豬的空腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），與試驗(yàn)Ⅰ組差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)Ⅲ組育肥豬的十二指腸、空腸和回腸絨毛高度均顯著高于其他三組（P<0.05），表明復(fù)合益生菌和低聚果糖合用可以增加育肥豬絨毛高度。由圖1-B可知，飼糧中單獨(dú)添加0.4%復(fù)合益生菌和單獨(dú)添加0.3%低聚果糖對(duì)育肥豬十二指腸、空腸和回腸隱窩深度無(wú)顯著影響（P>0.05）。飼糧中同時(shí)添加0.4%復(fù)合益生菌和0.3%低聚果糖顯著降低了育肥豬十二直腸、空腸和回腸隱窩深度（P<0.05）。由圖1-C可知，飼糧中單獨(dú)添加0.4%復(fù)合益生菌和單獨(dú)添加0.3%低聚果糖對(duì)育肥豬十二指腸、空腸和回腸絨毛高度/隱窩深度比值無(wú)顯著影響（P>0.05）。飼糧中同時(shí)添加0.4%復(fù)合益生菌和0.3%低聚果糖顯著增加了育肥豬十二直腸、空腸和回腸絨毛高度/隱窩深度比值（P<0.05）。
2.3 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬腸道菌群的影響
由表3可以看出，飼糧中添加0.4%復(fù)合益生菌、0.3%低聚果糖、或者添加0.4%復(fù)合益生菌+0.3%低聚果糖對(duì)育肥豬腸道菌群均具有顯著影響（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組育肥豬的腸道菌群數(shù)量無(wú)顯著差異（P>0.05）。試驗(yàn)Ⅲ組育肥豬的腸道乳酸桿菌數(shù)量分別比試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅰ組和對(duì)照組提高6.19%、14.25%、16.99%（P<0.05），腸道雙歧桿菌數(shù)量分別比試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅰ組和對(duì)照組提高6.23%、14.17%、17.45%（P<0.05），腸道大腸桿菌數(shù)量分別比對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組降低17.60%、16.64%、9.07%（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組豬的腸道乳酸桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量分別比對(duì)照組提高10.18%和10.56%（P<0.05），腸道大腸桿菌數(shù)量比對(duì)照組降低8.32%（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組組豬的腸道乳酸桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量分別比對(duì)照組提高7.18%和8.61%（P<0.05），腸道大腸桿菌數(shù)量比對(duì)照組降低12.66%（P<0.05）。
3.1 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能的影響
研究表明，益生菌的作用機(jī)理主要在于調(diào)節(jié)腸道菌群微生態(tài)平衡，增加有益菌的數(shù)量，降低有害菌數(shù)量，從而改善豬腸道消化吸收功能，提高豬生產(chǎn)性能（Meng等，2010；陳文輝等，2007；Broom等，2006）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中單獨(dú)添加0.4%的復(fù)合益生菌對(duì)育肥豬結(jié)束體重、平均日增重、平均日采食量和料肉比均有顯著影響，與秦紅（2016）和張慧等（2017）的結(jié)果一致，因此，飼糧添加0.4%復(fù)合益生菌可顯著提高育肥豬的生長(zhǎng)性能。韓美蘭等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加果寡糖顯著提高育肥豬的平均日采食量和平均日增重。本試驗(yàn)得到類似的試驗(yàn)結(jié)果，0.3%低聚果糖添加組育肥豬的平均日采食量和平均日增重均顯著高于對(duì)照組，料肉比顯著低于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中同時(shí)添加復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬的生長(zhǎng)性能具有顯著的促進(jìn)作用，其作用大于兩者效應(yīng)的簡(jiǎn)單相加，原因可能在于二者同時(shí)添加具有互補(bǔ)作用。
3.2 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬腸道形態(tài)的影響
腸道絨毛高度、隱窩深度和絨毛高度/隱窩深度是衡量腸道消化吸收能力的重要指標(biāo)：絨毛越長(zhǎng)，表明小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力越高（Dunsford等，1989）；隱窩深度越淺，表明小腸分泌活動(dòng)越強(qiáng)；絨毛高度/隱窩深度越大，表明腸內(nèi)膜面積大，消化吸收能力強(qiáng)（姚浪群等，2003）。秦紅（2017）研究結(jié)果表明，飼料中添加酵母菌顯著降低十二指腸腸絨毛高度，極顯著降低空腸隱窩深度，極顯著提高絨毛高度/隱窩深度；添加乳酸菌極顯著降低十二指腸隱窩深度，顯著提高空腸絨毛高度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加0.4%復(fù)合益生菌對(duì)育肥豬十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均沒(méi)有顯著影響，這可能與試驗(yàn)豬群的生理狀態(tài)、飼養(yǎng)環(huán)境、益生菌數(shù)量和活性等有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加0.3%低聚果糖對(duì)對(duì)育肥豬十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均沒(méi)有顯著影響。然而，飼糧中同時(shí)添加0.4%復(fù)合益生菌和0.3%低聚果糖對(duì)育肥豬腸道的絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度均具有顯著影響，表明復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)腸道形態(tài)的影響具有互補(bǔ)效應(yīng)。
3.3 復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬腸道菌群的影響
豬腸道微生物菌群的種類、數(shù)量及平衡狀態(tài)對(duì)豬腸道的消化吸收能力、免疫功能具有重要影響。秦紅（2016）研究結(jié)果表明，飼料中添加酵母菌和芽孢桿菌可以顯著增加腸道乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量，降低大腸桿菌的數(shù)量。項(xiàng)明潔等（2005）和張澤生等（2016）研究結(jié)果表明，低聚果糖對(duì)雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長(zhǎng)增殖均表現(xiàn)出促進(jìn)作用。本試驗(yàn)得到了類似的試驗(yàn)結(jié)果，添加0.4%復(fù)合益生菌組豬的腸道乳酸桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量分別比對(duì)照組提高7.18%和8.61%（P＜0.05），腸道大腸桿菌數(shù)量比對(duì)照組降低12.66%（P＜0.05）；添加0.3%低聚果糖組育肥豬腸道雙歧桿菌數(shù)量和乳酸桿菌數(shù)量分別比對(duì)照組提高10.56%和10.17%（P＜0.05），大腸桿菌數(shù)量比對(duì)照組降低9.38%。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，飼糧中同時(shí)添加0.4%復(fù)合益生菌和0.3%低聚果糖對(duì)腸道菌群數(shù)量的影響大于二者單獨(dú)添加的作用效果。
4結(jié) 論
飼糧中添加0.4%復(fù)合益生菌和0.3%低聚果糖均可改善育肥豬腸道菌群，提高育肥豬的生長(zhǎng)性能，其中0.3%低聚果糖的添加效果優(yōu)于0.4%復(fù)合益生菌的添加效果。從飼喂實(shí)踐來(lái)看，飼糧中同時(shí)添加益生菌和低聚果糖對(duì)育肥豬的生長(zhǎng)性能效果最佳。
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