日本AAAA级毛卡片免费观看_亚洲视频91_一级少妇黄色片_91成人?合_内射视频←WWW夜_91久色视频

生態(tài)養(yǎng)殖熱線和微信13277883322

纖維素分解菌與乳酸菌復(fù)合發(fā)酵條件的響應(yīng)曲面優(yōu)化分析

2018-12-16 10:21:04      點擊:
導(dǎo)讀

響應(yīng)曲面優(yōu)化法(response surface methodology,RSM)是一種實驗條件優(yōu)化的方法,適宜解決各類非線性數(shù)據(jù)處理的相關(guān)問題。其主要優(yōu)勢在于可對實驗水平進行連續(xù)的分析,而不是僅對孤立的實驗點進行,所以具有普通正交實驗方法無法比擬的優(yōu)越性。且此方法因研究的關(guān)系簡單(各因子間、因子與響應(yīng)值間)、省時準(zhǔn)確等,所以常被認為是降低開發(fā)成本、優(yōu)化加工條件、解決生產(chǎn)過程中實際問題的一種最為有效的方法,已被廣泛地應(yīng)用于各個領(lǐng)域。當(dāng)前,采用響應(yīng)曲面分析法主要是對發(fā)酵工藝參數(shù)和條件等進行優(yōu)化,而少見利用此方法優(yōu)化青貯玉米外源添加菌種量和比例的相關(guān)研究。

青貯玉米原料附著多種微生物,其中有益微生物主要為同型或異性發(fā)酵乳酸菌,有害微生物多以真菌為主。也有研究表明,某些真菌作為青貯添加劑添加,其不僅不會破壞原有的發(fā)酵過程,且可有效降低發(fā)酵底物的纖維素含量。其中黑曲霉(Aspergillus niger)作為我國農(nóng)業(yè)部和美國FDA 認證的安全菌種,可產(chǎn)生活性較高的多種胞外酶,適合飼用復(fù)合酶的固體發(fā)酵。綠色木霉(Trichoderma viride)作為自然界中普遍存在的真菌,其不但可以產(chǎn)生多種具有生物活性的酶系,且對植物病理生物防治具有重要的作用。此外,某些細菌如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生產(chǎn)菌,具有抑制大腸桿菌、沙門氏菌生長,以及對植物病原真菌的溶菌等作用。此外,上述菌種產(chǎn)生的酶系(糖化酶、纖維素酶、木聚糖酶等多種胞外酶)可將發(fā)酵底物中的多糖降解為寡糖和單糖,一方面可為菌體生長提供豐富的營養(yǎng)底物,另一方面對于青貯原料,可顯著降低發(fā)酵體系內(nèi)銨態(tài)氮和總氮的比值、中/酸性洗滌纖維含量、丁酸與總酸的比值,并大幅抑制了青貯有害微生物的生長。以往諸多研究均表明,酶系是否在青貯中發(fā)揮作用既要控制青貯發(fā)酵的環(huán)境,也要充分考慮發(fā)酵菌種間的協(xié)同性。因此控制這些微生物的合理繁殖是調(diào)制優(yōu)質(zhì)青貯的重要前提之一。鑒于此,本研究擬采用響應(yīng)曲面法,探究外源添加劑同、異型發(fā)酵乳酸菌和纖維素分解菌菌群(黑曲霉、綠色木霉、枯草芽孢桿菌)復(fù)合發(fā)酵的理論最佳發(fā)酵比例和劑量,為青貯玉米發(fā)酵提質(zhì)降耗的理論研究提供基礎(chǔ),并為我國新型青貯添加劑的開發(fā)提供依據(jù)。

1試驗材料與方法

1.1 主要材料

本研究主要菌種為購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(agricultural culture collection of china,ACCC)的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum,ACCC 11016)、戊糖片球菌(Pediococcus acidilactici,ACCC 05481)、枯草芽孢桿菌(bacillus subtilis,ACCC 19374)、黑曲霉(aspergillus niger,ACCC 30134)和綠色木霉(trichoderma viride,ACCC 30595)。購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(China Center of Industrial Culture Collection,CICC)的布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri,CICC 20293)。


1.2 試驗設(shè)計

通過查閱關(guān)于添加同、異型發(fā)酵乳酸菌(LAB)發(fā)酵青貯玉米的相關(guān)文獻,初步確定兩類LAB 的添加量為1×105、3×105 和5×105 cfu·g-1 (即5、5.48、5.70 lg cfu·g-1),其中同型發(fā)酵乳酸菌為植物乳桿菌和戊糖片球菌等比例混合(菌種數(shù)量比為1∶1)的復(fù)合菌,異型發(fā)酵LAB為布氏乳桿菌。纖維素分解菌菌群的添加比例為,黑曲霉∶綠色木霉∶枯草芽孢桿菌分別為1∶1∶2、1∶2∶1和2∶1∶1,添加量分別為0.1、0.2和0.3%。然后進行響應(yīng)曲面分析,優(yōu)化各菌種比例和添加量。


1.3 指標(biāo)測定及方法

將各個菌種復(fù)壯后,接種至選擇性培養(yǎng)基中擴繁,其中LAB采用MRS液體培養(yǎng)基[配方:酪蛋白胨10.0g,牛肉粉8.0g,酵母粉4.0g,葡萄糖20.0g,硫酸鎂0.2g,乙酸鈉5.0g,檸檬酸二銨2.0g,磷酸氫二鉀2.0g,硫酸錳0.05g,吐溫801.0g,蒸餾水1L,pH (6.2±0.2)],真菌Aspergillus nigerTrichoderma viride采用PDA 液體培養(yǎng)基(配方:馬鈴薯提取液1L,葡萄糖20.0g,自然pH),bacillus subtilis采用LB培養(yǎng)基(配方:酵母提取物5.0g,蛋白胨10.0g,氯化鈉10.0g,蒸餾水1L,pH7.0±0.2)。然后進行響應(yīng)曲面優(yōu)化,設(shè)計方法為BBD(Box-Behnken Design),本研究中響應(yīng)值為LAB和真菌的數(shù)量,自變量分別為同型發(fā)酵LAB添加量、異型發(fā)酵LAB添加量、纖維素分解菌菌群比例和劑量,分別以A、B、C和D代表,每個自變量的3個試驗水平(低、中、高)編碼分別為-1、0、1(表1)。

1545618135112424.jpg

然后將各個擴繁后的菌液按照BBD 設(shè)計的添加比例和量進行混合,厭氧培養(yǎng)3d后(35℃,pH4.5)測定液體培養(yǎng)基中LAB和真菌的數(shù)量,具體采用傳統(tǒng)菌種計數(shù)法計數(shù),每個梯度做3個重復(fù)。取菌落數(shù)在30~300的平板作為有效計數(shù)板,菌落以肉眼可見為準(zhǔn),每克鮮樣(FM)中微生物的數(shù)量,即菌落形成單位(cfu),計算方法為:

微生物數(shù)量=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×1000/涂布吸樣量。


1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)的初步整理和統(tǒng)計采用Microsoft Excel 2011軟件。采用DesignExpert軟件進行響應(yīng)曲面優(yōu)化,設(shè)通過最小二乘法擬合的二次多項式模型為:

式中:Y 為預(yù)測響應(yīng)值,即LAB或真菌數(shù)量的預(yù)測值;xi 和x為自變量的編碼值,c0 為常數(shù)項,ai 為線性系數(shù),bij 為二次項系數(shù),n 為因子數(shù)(n =4)。按照BBD試驗設(shè)計的統(tǒng)計學(xué)要求對二次多項式中各試驗進行回歸擬合,擬合后獲得回歸方程,運用軟件中自帶功能,選取兩個預(yù)測值均為最大(Y1 為LAB,Y2 為真菌數(shù)量),以此得到最佳的各水平編碼值,最終計算求得各個變量的最佳組合。

2結(jié)果與分析

2.1 模型建立與顯著性檢驗分析

采用BBD設(shè)計得到變量代碼,按照變量代碼進行試驗,結(jié)果測得LAB最大值為9.96 lg cfu·g-1,其代碼為1(A)、1(B)、0(C)、0(D);最小值為7.93 lg cfu·g-1,其代碼為-1(A)、0(B)、-1(C)、0(D),總體平均值為8.63 lg cfu·g-1,總體標(biāo)準(zhǔn)差(SD)為0.16,變異系數(shù)(CV)為1.89%.真菌測得最大值為5.23lgcfu·g-1,其代碼為0(A)、1(B)、0(C)、1(D);最小值為3.92lgcfu·g-1,其代碼為1(A)、1(B)、0(C)、0(D),總體平均值為4.49lgcfu·g-1,總體SD為0.27,CV 為6.05%(表2)。

1545618188103809.jpg

利用DesignExpert軟件,將表2的Y1 和Y2 數(shù)據(jù)按二次多項式模型進行多元回歸擬合,獲得Y1 和Y2 對編碼自變量A、B、C和D的二次多項回歸方程(表3):

1545618235937490.jpg

 Y1 =8.56+0.50A +0.50B +0.07C +0.04D +0.09A2+0.11B2-0.01C2-2.58×10-3D2+0.21AB +0.06AC-0.04AD-0.04BC-0.06BD+0.08CD;

Y2=4.38-0.02A -0.05B-8.33×10-3C+0.32D-3.58×10-3A2 -0.04B2 -0.03C2+0.35D2 -0.17AB+0.30AC-0.01AD-0.18BC+0.18BD-0.04CD。

通過對Y1、Y2 兩個模型的方差分析可知(表3),本研究所選用的二次多項式模型顯著性為:Y1,F=17.23,P<0.01;Y2,F=2.83,P=0.03.失擬項均不顯著(Y1:P=0.50,Y2:P=0.68).決定系數(shù)R2 分別為Y1=0.95,Y2 =0.74.矯正決定系數(shù)R2adj 分別為Y1=0.89,Y2=0.48.顯著性檢驗結(jié)果表明(表3),Y1模型中試驗因素A 和B對LAB數(shù)量的曲面效應(yīng)影響均極顯著(P<0.01),因素A 和B的交互作用影響顯著(P=0.02),其余因素及各因素間的交互作用影響均不顯著(P>0.05).Y2 模型中僅試驗因素D、因素A 和B的交互作用對真菌數(shù)量的曲面效應(yīng)影響顯著(P<0.05),其余各因素及因素間的交互作用影響均不顯著(P>0.05)。


2.2 復(fù)合發(fā)酵真菌和乳酸菌數(shù)量的響應(yīng)

曲面分析通過對Y1 所繪制的響應(yīng)曲面圖及等高線圖可知(圖1),A 和B兩個因素的交互對Y1 影響最大,當(dāng)A和B的代碼越接近于1,Y1 的值越趨于最大值(9.96 lg cfu·g-1)。A 和C、D 因素的交互作用中,起主要作用的均為因素A.B和C、D因素的交互作用中,起主要作用的均為因素B.C和D兩個因素的交互對Y1 的值基本無影響(P =0.36)。總體來看,僅A 和B因素的交互作用影響顯著(P =0.02),其余兩因素的交互作用對Y1 的值影響均不大(P>0.05)(表3)。通過對Y2 所繪制的響應(yīng)曲面圖及等高線圖可知(圖2),對Y2 的值起主要作用的為因素D,且因素D 和其他因素的交互作用中因素D也也起到主要作用,但總體來看,除A、B因素交互作用外,其余各因素之間的交互作用對Y2 的值影響均不大(P >0.05)(表3)。最終利用軟件求出Y1 和Y2 均為最大值的代碼解(最優(yōu)解)為A=1.000,B=0.853,C=1.000,D=0.996,將代碼解換算成實際自變量可得,同型發(fā)酵LAB添加量為5×105 cfu·g-1(5.70 lg cfu·g-1),異型發(fā)酵LAB 添加量為4.7×105 cfu·g-1 (5.67 lg cfu·g-1),纖維素分解菌比例為2∶1∶1,添加量為0.3%。

1545618271376269.jpg

1545618318450542.jpg

討 論

以往研究很少對多種類菌種的復(fù)合發(fā)酵進行研究,類似研究多在發(fā)酵堆肥中使用。本研究對LAB和纖維素分解菌復(fù)合發(fā)酵的發(fā)酵比例劑量進行了優(yōu)化,而在實際發(fā)酵過程中,由于真菌和細菌的生長環(huán)境不同(好氧/厭氧)而在復(fù)合培養(yǎng)情況下僅能確定一種生長環(huán)境,因此本研究模擬青貯發(fā)酵初期的好養(yǎng)環(huán)境對復(fù)合菌種進行了優(yōu)化,得到的結(jié)果能很好地為今后青貯復(fù)合發(fā)酵添加劑的開發(fā)提供理論方法。此外,由于多種菌劑的復(fù)合發(fā)酵體系比較復(fù)雜,本研究僅對其進行了初步的探索,因此還需要繼續(xù)開展實踐研究。

本研究對復(fù)合菌種發(fā)酵體系內(nèi)的LAB數(shù)量進行優(yōu)化,而未對傳統(tǒng)概念上認識的pH、乳酸或乙酸含量等發(fā)酵產(chǎn)物進行優(yōu)化。其一方面原因為,LAB的代謝產(chǎn)物較多,產(chǎn)生情況較為復(fù)雜,且受發(fā)酵環(huán)境和底物的影響極大,而無論其代謝產(chǎn)物種類如何,其必然受自身數(shù)量的影響。另一方面,由于本研究中探究復(fù)合發(fā)酵體系,單純以某種LAB的代謝產(chǎn)物進行優(yōu)化,并和真菌數(shù)量進行響應(yīng)面分析,不能反映整體情況,且指標(biāo)上不具有統(tǒng)一性。另外,選取多個LAB的多種代謝產(chǎn)物進行優(yōu)化,其操作性較差,不易進行響應(yīng)曲面優(yōu)化。復(fù)合體系中將真菌數(shù)量作為另一個優(yōu)化指標(biāo),其主要原因為本研究選取的能產(chǎn)生胞外酶的微生物,其產(chǎn)酶含量與數(shù)量呈顯著正相關(guān)關(guān)系,以數(shù)量為響應(yīng)值即能很好的反映產(chǎn)酶的含量。

眾所周知,LAB有抑制真菌生長的特性,而本研究需要真菌在青貯玉米發(fā)酵初期發(fā)揮其產(chǎn)胞外酶的特性,因此對好氧情況下真菌和LAB均達到最大值的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。研究發(fā)現(xiàn),在確定的4個發(fā)酵條件中,同、異型發(fā)酵LAB的數(shù)量以及其交互作用對總體LAB數(shù)量影響最大(表3),且當(dāng)兩類LAB數(shù)量最多時,總體LAB數(shù)量也最多,這與LAB生物學(xué)基礎(chǔ)理論相同。在發(fā)酵體系內(nèi)加入的纖維素分解菌菌群的比例和劑量兩個因素對LAB數(shù)量無顯著影響(P >0.05),也進而證明了LAB數(shù)量并未受纖維素分解菌的抑制,這與諸多的研究結(jié)果相似,他們也都認為在厭氧條件下真菌不會抑制LAB 的生長。另外,本研究為多種類菌種的復(fù)合發(fā)酵,因此選用的培養(yǎng)條件不可能達到所有菌種最適的生長環(huán)境,且實際生產(chǎn)中青貯玉米的發(fā)酵環(huán)境也難于控制,所以本研究僅模擬了青貯發(fā)酵初期(3d內(nèi))的環(huán)境進行研究,這可能也是導(dǎo)致LAB生長不受真菌抑制的主要原因。本研究還發(fā)現(xiàn),在確定的4個發(fā)酵條件中,影響真菌數(shù)量的主要因素為纖維素分解菌的添加劑量,且同、異型發(fā)酵LAB添加量的交互作用對真菌也有顯著影響(P<0.05),而纖維素分解菌的添加比例對其無顯著影響(表3)(P>0.05),由此也進一步證實了LAB對真菌的抑制作用。另外,纖維素分解菌的比例和添加量的交互作用中以添加量為主導(dǎo),其添加量越高,真菌數(shù)量越高(圖2。這也說明了真菌添加劑量對其數(shù)量起到了決定性作用。值得注意的是,當(dāng)纖維素分解菌的添加比例分別與同/異型發(fā)酵LAB添加量交互時,其產(chǎn)生了較大變異(圖2),這可能是不同種LAB抑制真菌的種類不同所致,其具體原因還有待進一步分析研究。除此之外,當(dāng)纖維素分解菌的添加劑量分別與同/異質(zhì)型LAB 添加量交互時,抑制真菌的效果異性發(fā)酵優(yōu)于同型發(fā)酵(圖2),這表明異型發(fā)酵LAB產(chǎn)抑制真菌生長的乙酸含量高于同型發(fā)酵LAB。

1545618369626026.jpg


1545618379120566.jpg

結(jié) 論

1)LAB數(shù)量(Y1)和真菌數(shù)量(Y2)對編碼自變量A(同型發(fā)酵LAB 添加量)、B (異型發(fā)酵LAB 添加量)、C(纖維素分解菌比例)和D (纖維素分解菌添加劑量%)的二次多項回歸方程為:

Y1=8.56+0.50A +0.50B +0.07C +0.04D +0.09A2+0.11B2 -0.01C2 -2.58×10-3 D2 +0.21AB+0.06AC -0.04AD -0.04BC -0.06BD +0.08CD ;

Y2=4.38-0.02A -0.05B -8.33×10-3C +0.32D-3.58×10-3A2 -0.04B2 -0.03C2 +0.35D2 -0.17AB+0.30AC-0.01AD -0.18BC +0.18BD -0.04CD。

2)響應(yīng)曲面分析法優(yōu)化試驗條件結(jié)果為,同型發(fā)酵LAB添加量為5×105 cfu·g-1,異型發(fā)酵LAB添加量為4.7×10cfu·g-1,纖維素分解菌比例黑曲霉∶綠色木霉菌∶枯草芽孢菌為2∶1∶1,添加量為0.3%。


相關(guān)鏈接:加強型多功能豬用加酶復(fù)合益生菌,降低臭味、氨氣、蒼蠅密度;降低料耗、促進生長、提前出欄;提升腸道健康水平,提高母豬繁殖性能減少用藥和死亡淘汰率

微生物知識微生物專業(yè)知識微生物試驗報告與運用益生菌與人體健康
最新資訊
關(guān)閉
關(guān)閉
加微信好友咨詢
技術(shù)QQ客服
點擊這里給我發(fā)消息
淘寶旺旺客服
微信公眾號和客服
主站蜘蛛池模板: 91视频免费看网站_300部国产真实乱_国产麻豆乱码精品一区二区三区_999久久久精品免费毛片_国产精品爽爽va在线观看无码_最好的2019中文大全在线观看_国产又黄又爽又色的免费视频白丝_九九视频在线观看 | 久草色香蕉_色原网九区_影视在线观看免费观看_国内精品视频在线观看免费网站_午夜爱爱免费视频_国产福利久久久_欧美老肥妇做爰bbww_日本三级欧美三级人妇视频黑白 | 日本老逼_欧美丰满熟妇乱XXXXX网站_性少妇中国内射XXXX狠干_国产婷婷成人久久av免费高清_九一在线观看_一级做a爰性色毛片免费视频_国产在线免费_亚洲女人网 | 亚洲激情综合视频_一本之道加勒比在线观看_丰满的年轻搜子在线观看_亚洲国产成人精品女人_精品国产aⅴ一区二区三区_久久777国产线看观看精品_成人a级免费视频_av天天干 | 99国产精品99久久久久久娜娜_飘雪影院在线观看免费版_久草播放_亚洲1区在线_特黄av_欧美日韩成人_蜜臀AV色欲无码A片一区_h动漫在线视频 | 欧美大片a片免费看视频频_麻豆精品影院_国产精品手机视频一区二区_久久懂色精品99综一区合_久久综合干_国产在线视频不卡二_国产天堂久久综合_79av国产 | 中文字幕三区_无码人妻久久久一区二区三区_国内揄拍国内精品人妻_porn麻豆_国产精品性夜天天视频_大陆老太XXXXXHD_91丨国产丨精品入口_精品久久久久久久免费人妻 | 久久蜜桃av一区二区天堂_岛国片在线免费观看_高清三级无码少妇_91插插影_a级在线观看_亚洲综合a_玩弄放荡人妇系列AV在线网站_国产99精品一区 | 国产私人影院_8090成人午夜精品无码_久草网av_99产精品成人啪免费网站_噜啊噜在线视频_国产精品视频福利_九九视频精品在线观看_91视频免费进入 | 欧美变态另类刺激_91精品少妇99在线观看_欧美另类在线制服丝袜国产_亚洲二区三区在星空传媒_久久精品国产精品青草_日本精品久久久久久久_涩涩导航_欧美性色a | 激情内射亚州一区二区三区爱妻_91成人精品一区二区三区四区_caoporen个人免费公开_男人猛吃奶女人爽视频_欧美人与动牲交A精品_特级西西大胆www147_国产一级毛片黄片_玖玖精品在线 | 国产成人一区二区三区影院动漫_国产成人在线视频免费观看_久久99女女久久99久久_www.久久爱.com狼人_国产又爽又刺激的视频_日韩中文在线观看_天天草天天爱_狠狠爱天天操 | 中文字字幕在线观看_国产亚洲欧美日韩在线爱豆_色就是色亚洲色图_国产裸体歌舞一区二区_无限在线看免费视频大全_艳妇臀荡乳欲伦交换在线播放_一二三四区在线播放_视色视频在线观看 | 亚洲人成网站在线播放大全_久久婷婷国产综合国色天香_成人高潮免费视频_日本污ww视频网站_久久久久久久久久穴_中国裸男自慰GV网站_新白娘子传奇50集免费赵雅芝版_四虎在线播放 | 4455四色成人网_97影院在线午夜_中国性猛交xxxx乱大交3_99精品久久久久久中文字幕_亚洲精品久久国产高清情趣图文_天天做天天添AV国产亚洲_国产91精品不卡视频_欧美精品一区二区三区免费视频 | 亚洲成AV人片一区二区梦乃_高清日韩一区_国产国产精品人在线观看_www.亚洲综合_日皮视频在线_一区精品在线_永夜星河一到30集免费观看_亚洲AV福利天堂在线观看 | 品色堂永远免费_俄罗斯大荫蒂女人毛茸茸_国产精品一级在线_亚洲人精品午夜射精日韩_日日网站_成人福利视频网_日韩一区二区三区网站_濑亚美莉av番号大全 | 亚洲图色av_性欧美暴力猛交69HD_久久久蜜臀国产一区二区_国产一区在线免费观看_妖精色AV无码国产在线看_久久精品99国产国产精_三级另类_免费视频a | 亚洲高清精品视频_欧美9页_国产a∨精品一区二区三区不卡_2019亚洲午夜无码天堂_伊人久久综在合线亚洲2019_www.夜夜撸_久久精品国产精品亚洲综合_日本不卡无码二区三区 | 91九色国产_九九热这里只有精品8_成人在线啊v_国产高清乱伦精品_精品在线视频一区_日韩视频网_亚洲精品无码一区二区_中文字幕人妻熟女在线 | 班花在教室伦流澡到高潮视频_国产精选91热在线观看_黑人一级大片_蜜臀传媒_红杏出墙记_最近免费观看高清韩国日本大全_亚洲日韩精品无码专区网站_人妻丝袜av先锋影音先 | 日本男女啪啪_欧美国产日韩久久_亚洲在线视频观看_亚洲AV乱码专区国产乱码_国产一级不卡毛片_怡红院av_国产乱子伦精品免费无码专区_亚洲AV无码国产一区二区三区 | 久久国产热播_天天艹天天干天天_caoporn视频在线_亚洲一级特黄_一二三级毛片_日韩在线亚洲_欧美日韩国产精品一区_免费观看性欧美大片无片 | 中文字幕人妻日本无码_久久综合视频网_精品偷拍无码专区亚洲_亚洲aⅴ综合色区无码一区_亚洲视频一区在线播放_中文字幕自拍偷拍_性欧美videos高清精品_草久免费视频 | 高清精品一区二区三区_欧美一级做a爰片久久高潮_欧美成人视_亚洲同性同志一二三专区_人与野鲁交xxxⅹ网站_国产成人精品福利一区二区_最新日本中文字幕在线观看_国产精品综合不卡av 亚洲九九精品_国产不卡视频一区二区三区_久操视频免费看_热99久久精品_婷婷久久精品一区二区_日本免费人成在线观看_xxxx免费_国产成人一区二区三区在线视频 | 人操人爱_欧美日一区_国产精品盗摄!偷窥盗摄_免费的网站永久免费_嫩草www_国产成人精彩在线视频九色_黄色日本片_国产精品传媒入口麻豆 | 国产成人无码精品午夜福利A_日本熟妇HD人妻_国产成年无码a∨片在线韩国_秋霞福利_午夜精品91_AA片子吇中文字处女_欧美夜噜噜免费观看_国产精品青青草原免费无码 | 在线观看亚洲AV每日更新无码_亚洲成人黄色影院_一级片视频免费在线观看_鲁大师成人一区二区三区_天天久久综合_日日噜噜夜夜狠狠久久无码区_美女下部隐私(不遮挡)_精品国产SM捆绑最大网免费站 | 亚洲AV无码专区国产乱码京东传媒_色一情一乱一乱一区91Av_av免费在线观看网址_中文字幕精品—区二区_AAA级黄色视频_日本视频一二三区_强行糟蹋人妻HD中文_精品一区2区三区 | 在线亚洲日产一区二区_最新av在线资源网无码_国产成AV人片久青草影院_免费观看高清a级毛片视频_中文字幕乱码人在线视频1区_黄色日韩视频_国产日韩久久久_久久国产精品高清 | av黄色免费看_aⅴ中文字幕不卡在线无码_我不卡一区二区_欧美日韩一区二区三区高清_最近免费中文字幕中文高清6_日本色老头_99久久国语露脸精品对白_最美女人体内射精一区二区 | 国产成人a高清视频_9丨九色丨国产人妻一区二区_超碰999_中文字幕久久精品一区二区_人人爽网站_国产一区二区三区免费观看在线_欧美精品免费一区二区三区_蜜桃av网 | 中文字幕精品A片不卡一卡二_好吊精品_97日日日_又粗又深又猛又爽的视频A片_国产精品3区_久久爱www久久做_少妇人妻AV无码专区_麻豆国产AV丝袜白领传媒 | 亚洲激情综合视频_一本之道加勒比在线观看_丰满的年轻搜子在线观看_亚洲国产成人精品女人_精品国产aⅴ一区二区三区_久久777国产线看观看精品_成人a级免费视频_av天天干 | 精品国产18久久久久久怡红_国产一区二区三区久久99_夜夜操夜夜爽_久久天堂视频_日本人妻巨大乳挤奶水_热久久最新_色一情一乱一伦一区二区三欧美_亚洲第一页在线观看 | 欧美人与禽交无码免费视频_一级黄色视屏_久久久亚洲裙底偷窥综合_天天碰夜夜操_av不卡一区二区_日本网站在线免费观看_一级片大奶子_国产精品女教师久久二区二区 深夜福利免费在线观看_欧洲性开放少妇ZOZO_又大又粗又硬又爽又黄毛片_欧洲精品_亚洲欧美成人_18禁黄网站禁片免费观看国产_日本少妇XXX做受_视频在线观看91 | 日本特黄特色特爽大片_性高爱久久久久久久久_欧美麻豆视频_99re这里只有精品99_亚洲国产片_欧美一级片在线视频_午夜免费视频观看_美国特级a毛片免费网站 | 久久婷婷国产_亚洲伦理片在线_色五月色开心色婷婷色丁香_青青在线视频观看_波多野结衣视频一区_日韩在线理论_国产成人免费在线_久久中文免费视频 | 手机久草视频分类在线观看_国产高清不卡_亚洲AV无码AV制服另类专区_亚洲在线第一区_国产熟妇高潮呻吟喷水_成人欧美视频_亚洲日韩视频免费观看_国模无码人体一区二区 | 国产黑丝一区二区_精品久久看_日韩欧美在线观看一区二区_亚洲精品在线免费_北条麻纪在线观看aⅴ_日韩成人免费av_999国产精品视频免费_国产网址在线观看 | 最近国产中文字幕_av在线免费播_亚洲裸男gv网站_www黄色毛片_四虎现在的网址是什么_欧美国产精品久久久乱码_亚洲一区二区三区四区在线免费观看_av美女网 |