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導   語

微生物發(fā)酵飼料富含小肽、益生菌、有機酸、酶和細菌素等代謝產(chǎn)物，可發(fā)揮提高飼料消化率、改善腸道健康、促進宿主免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)等作用。現(xiàn)代養(yǎng)殖中，仔豬實行早期隔離斷奶并采食高蛋白日糧等導致其腸絨毛受損、緊密連接蛋白降低、菌群紊亂、病毒性腹瀉產(chǎn)生、抗病力下降等。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加復合酸化劑能顯著提高空腸絨毛高度并降低隱窩深度，提高日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率；復合酶制劑能顯著提高日糧能量、蛋白質(zhì)和有機干物質(zhì)的消化率；復合微生態(tài)制劑能改善血液抗氧化指標、降低腸道內(nèi)容物pH、改善腸道菌群平衡，降低腹瀉率。總之，微生物發(fā)酵料因富含各種動物所需營養(yǎng)素和代謝產(chǎn)物，能針對仔豬腸道特征，促進腸道消化吸收功能，維護腸道健康。本試驗旨在研究微生物發(fā)酵料對仔豬生產(chǎn)養(yǎng)殖和替代抗生素的應用效果，為發(fā)酵飼料的應用提供參考依據(jù)。

微生物發(fā)酵料為某公司依托“農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物飼料國家重點實驗室”自主研發(fā)，并提供。優(yōu)選芽孢桿菌、酵母菌、乳酸桿菌和丁酸梭菌4種菌，以玉米、豆粕和黃酒糟等為底物，采用二次梯度發(fā)酵工藝進行生產(chǎn)，發(fā)酵后活菌數(shù)≥2．66x108CFU／g，粗蛋白質(zhì)為16．51％、酸溶蛋白(占粗蛋白質(zhì)含量)≥18％、氨基態(tài)氮(占粗蛋白質(zhì)含量)為3．63％。試驗仔豬來自吳川市某農(nóng)牧有限公司，試驗地點為某公司養(yǎng)殖試驗基地。

試驗結(jié)束后稱重，每個重復取3頭豬前腔靜脈采血5 mL左右，室溫下靜止2 h，4℃冰箱放置過夜，4 500 r／min離心10 min，分離血清，-20℃保存待測。使用血紅蛋白儀現(xiàn)場采集測定豬只耳緣靜脈中血紅蛋白(HB)含量；使用深圳雷杜生命科技CHEMRAY 240全自動生化儀測定葡萄糖(GLU)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(BUN)含量；采用Elisa方法測定總抗氧化物酶(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，所用試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1．3．4    糞便菌群指標

1．3．4．1    樣品采集

試驗結(jié)束后每個重復隨機選取3頭健康仔豬，使用無菌棉簽伸到肛門內(nèi)挖取新鮮糞便各1g，置于4℃冰上，然后在無菌操作臺上檢測菌落總數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌和乳酸菌數(shù)。

1．3．4．2    培養(yǎng)基

菌落總數(shù)測定使用平板菌落計數(shù)法，瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨5．0 g，酵母浸粉2．5 g，葡萄糖1．0 g，瓊脂15 g，pH為(7．2 ±0．1)，用去離子水定容至1．0 L；大腸桿菌顯色培養(yǎng)基：蛋白胨10．0 g，酵母膏粉3．0 g，氯化鈉5．0 g，瓊脂12．0 g，十二烷基硫酸鈉0．1 g，混合色素2．7 g，pH為(7．0 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基：蛋白胨19．6 g，酵母膏粉3 g，氯化鈉5 g，膽鹽1．5 g，瓊脂12 g，混合色素6．4 g，pH(7．0 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L；乳酸桿菌使用LBS培養(yǎng)基：酵母浸粉5．0 g，胰酪蛋白胨10．0 g，磷酸二氫鉀6．0 g，硫酸亞鐵0．034 g，硫酸鎂0．575 g，葡萄糖20．0 g，乙酸鈉25．0 g，檸檬酸銨2．0 g，硫酸錳0．12 g，瓊脂15．0 g，pH(5．5 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L。

1．3．4．3測定方法與步驟

在超凈工作臺分別迅速取糞便內(nèi)容物0．1 g，置于滅菌15 mL試管中，加入0．9％滅菌生理鹽水10 mL，在20℃恒溫震蕩箱l 50 r／min震蕩10 min，使樣品充分搖勻，此液為10-2稀釋液，然后吸取1．0 mL置于盛有9．0 mL 0．9％滅菌生理鹽水的滅菌試管中進行10-3稀釋，再依次進行到10-6稀釋。分別將10-4、10-5、10-6稀釋液100mL涂抹于各培養(yǎng)基上，37℃有氧培養(yǎng)18～24 h后進行菌落計數(shù)。各稀釋濃度設(shè)3個重復。采用平板計數(shù)法進行菌落計數(shù)，并換算成1g(CFU／g)菌液，即用每克糞樣含活菌數(shù)表示。

采用SPSS 22．0軟件進行統(tǒng)計分析，采用獨立樣本t檢驗，結(jié)果以平均值 ±標準差表示。P<0．05為差異顯著，P>0．05為差異不顯著。

由表2可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料能提高仔豬ADG和ADFI(P<0．05)，降低腹瀉率(P<0．05)。

由表3可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料能顯著提高仔豬血液中HB、GLU和GLB的含量(P<0．05)；對血清ALT、AST、TP、ALB、TC、TG和BUN無影響。

由表4可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料組能提高血清T-AOC和SOD活性(P<0．05)，降低MDA含量(P<0．05)。

由表5可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料組能降低仔豬糞便大腸桿菌數(shù)，提高糞便乳酸桿菌數(shù)(P<0．05)。對糞便總菌數(shù)和沙門氏菌數(shù)無影響。

3．1   微生物發(fā)酵料對仔豬生長性能和腹瀉率的影響

本試驗基礎(chǔ)飼糧含吉他霉素和土霉素鈣各50 g／t，吉他霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要用于治療革蘭氏陽性菌、支原體及鉤端螺旋體等感染；土霉素為四環(huán)素類抗生素，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、支原體、螺旋體、放線菌及某些原蟲均有效(中國藥典，2015)。目前能有效預防和治療革蘭氏陰性菌的藥物添加劑相對較少，本試驗微生物發(fā)酵料含芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌和丁酸梭菌的總量可達2× 108／g，發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸及其他有機酸，使pH降低至4．5，同時能降解植物抗營養(yǎng)因子，產(chǎn)生小肽和游離氨基酸、消化酶、維生素及細菌素等，提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收效率。本研究結(jié)果表明，微生物發(fā)酵料能顯著提高仔豬ADFl和ADG，降低腹瀉率，而且達到了替代部分抗生素的作用，與絕大部分研究結(jié)果相符。推斷與發(fā)酵料能產(chǎn)生有機酸、細菌素等發(fā)揮抑菌作用有關(guān)。

3．2   微生物發(fā)酵料對仔豬血液指標的影響

HB是紅細胞內(nèi)運輸氧的特殊蛋白質(zhì)，也是最重要的維持內(nèi)環(huán)境pH穩(wěn)定的緩沖物質(zhì)，幼年動物HB含量與抗病力密切相關(guān)。本試驗首次在仔豬上發(fā)現(xiàn)微生物發(fā)酵料能顯著提高血液中HB含量，與王偉光等發(fā)現(xiàn)益生菌能改善兒童營養(yǎng)性缺鐵性貧血結(jié)果一致，均能顯著提高血液中HB含量，可能是因為微生物發(fā)酵料含促進HB生成的代謝產(chǎn)物，能引起HB合成速度大于代謝速度，從而提高仔豬HB含量，但具體作用機理有待進一步研究。

血清GLU是動物供能的主要物質(zhì)，其主要是飼糧經(jīng)消化系統(tǒng)后的代謝產(chǎn)物，仔豬斷奶后早期1—7 d血清GLU降低，且肝臟糖酵解關(guān)鍵酶丙酮酸激酶活性及其基因相對表達均降低，但飼糧添加復合微生態(tài)制劑可以提高仔豬血清GLU含量，同時也能提高血清TP和GLB含量。本試驗中，微生物發(fā)酵料能提高仔豬血清GLU和GLB含量，與報道結(jié)果一致，說明微生物發(fā)酵料能參與或影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進動物免疫功能。血清中TC含量是衡量機體脂代謝的重要指標，反映了機體脂代謝情況。本試驗中，微生物發(fā)酵料對血清TC、TG無影響，這與Czech等報道的日糧酵母菌降低血清TC和TG含量不符，推測與酵母類型及飼糧添加水平相關(guān)。

抗氧化系統(tǒng)是動物機體清除體內(nèi)多余活性氧，保護自身免受氧化損傷的重要體系，包括非酶類和酶類抗氧化劑。動物機體在生化反應過程中會產(chǎn)生一系列的活性氧，這些活性氧對細胞中的大分子物質(zhì)例如蛋白質(zhì)、脂類、DNA等造成損害，且能使脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生丙二醛等有害物質(zhì)引起機體損傷。而動物機體抗氧化系統(tǒng)包含各種抗氧化酶如SOD、GPX等和非酶物質(zhì)如維生素E、維生素A和谷胱甘肽等。本試驗表明，微生物發(fā)酵料能提高機體T-AOC能力、SOD活性，降低MDA含量，推測因其含各種豐富的有益代謝產(chǎn)物，如維生素、消化酶等均能提高機體自身抗氧化能力，與李濤、王娟娟等試驗結(jié)果一致。

3．3   微生物發(fā)酵料對仔豬糞便菌群的影響

糞便中細菌菌群數(shù)量可直接反映動物胃腸道微生物的內(nèi)環(huán)境變化。研究表明，腹瀉仔豬因為有害菌群增多抑制了有益菌群生長從而出現(xiàn)腹瀉,健康仔豬腸道內(nèi)有益優(yōu)勢菌群為乳桿菌>擬桿菌>雙歧桿菌，腹瀉仔豬腸道內(nèi)有害優(yōu)勢菌群為大腸桿菌>沙門氏菌。本研究所用微生物發(fā)酵料能顯著降低仔豬糞便大腸桿菌數(shù)，提高乳酸桿菌數(shù)，與其他學者所做研究報道一致，同時也有降低糞便沙門氏菌的趨勢。

飼糧添加4％的微生物發(fā)酵料替換配方中4％玉米，同時取消飼糧中50 g／t土霉素鈣藥物添加劑，可以提高仔豬生長性能，增強仔豬抗氧化能力和血清健康水平，同時改善腸道健康。

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