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在飼料中添加抗生素可促進畜禽生長，提高飼料轉化率以及預防和治療疾病，但抗生素的長期大量使用會造成有害菌的耐藥性及畜產品藥物的殘留，食用藥物殘留的畜產品會使人產生過敏反應、中毒等危害，損害人類健康。目前微生態制劑作為抗生素的替代品，被廣泛使用。謝全喜等研究發現飼喂添加2%的微生態試劑組肉雞生長性能顯著高于對照組與抗生素組;肉雞17日齡和24日齡時，飼喂添加2%的微生態試劑組肉雞血清免疫球蛋白G含量分別比抗生素組增加24.3%和16.2%，且差異顯著。胡順珍等研究表明，飼喂微生態試劑組肉雞盲腸中大腸桿菌與乳酸菌數量顯著高于對照組。Newbold等報道微生態制劑能夠改善動物的腸道有益菌群，抑制有害菌生長，從而促進動物生長發育，提高飼料利用率，同時還克服了藥殘留和耐藥性的缺點。但在飼料加工過程中微生態試劑也存在損耗較大的問題。王超研究微生態制劑在沒有添加保護劑等保護措施下，制粒工藝中調質時間極顯著影響了微生態制劑中乳酸菌、酵母菌和芽胞桿菌活菌數量。李鑫等研究在飼料制粒后，芽孢桿菌的存活率較高，乳酸菌則比較脆弱，不能抵抗制粒時的溫度和壓力等加工條件。以上研究是針對飼料加工后微生態制劑的損失情況或者對微生態制劑對肉雞生長性能等指標的研究，而針對有關飼料加工工藝對微生態制劑損失的影響及其對肉雞生長性能和免疫功能的影響研究較少。因此，本試驗通過研究普通調質制粒(OT)工藝和大料高溫調質低溫制粒(ET)工藝對復合微生態制劑活性及飼料質量的影響，以及不同加工工藝和復合微生態制劑替代抗生素對肉雞生長性能和免疫功能等的影響，為微生態制劑在肉雞飼料中的應用及加工工藝的選擇提供參考依據。

1.1 試驗飼糧

基礎飼糧組成及營養水平見表1。

OT工藝將所有原料粉碎配料混合后調質制粒，前期料粉碎采用2.0mm篩片孔徑，后期料粉碎采用2.5mm篩片孔徑，制粒機環模模孔直徑3mm、長徑比10∶1，調質溫度75℃，調質時間約為30s;ET工藝先將飼糧中的大料粉碎配料混合(粉碎粒度同OT工藝)，再在85℃調質溫度下進行熟化處理，經冷卻后與預混料、微生態制劑等二次配料混合調質時間約為30s，再經60℃調質溫度下制粒成型，調質時間約為30s。

1.3 試驗動物與飼養管理

養殖試驗在中國農業科學院南口養殖基地進行，選用864只1日齡白羽愛拔益加(AA)肉仔雞，初始體重為(48.00±0.05)g，按照性別比例一致原則隨機分為8組，每組6個重復，每個重復18只雞，進行為期42d的飼養試驗，分為前期(1～21日齡)和后期(22～42日齡)2個階段，前期飼喂破碎料，后期飼喂顆粒料。

飼養管理參照AA肉仔雞的飼養管理手冊進行，試驗期間做好光照、溫度的控制，保持良好的通風，定期消毒、清糞和打掃雞舍，按照免疫程序做好疫苗的免疫，觀察雞只的狀況，做好死淘記錄，自由采食自由飲水，做好飼料采食記錄。

1.4 指標測定

1.4.1 菌落總數與菌種存活率

枯草芽孢桿菌檢測采用GB/T26428—2010《飼用微生物制劑中枯草芽孢桿菌的檢測》;地衣芽孢桿菌檢測采用NY/T1461—2007《飼料微生物添加劑地衣芽孢桿菌》;包被乳酸菌檢測采用破囊液溶解后，以生理鹽水為稀釋劑做10倍遞增稀釋，取適宜梯度稀釋液涂于滅菌后的瓊脂平板中，待37℃、48h溫育，計數。

菌種存活率(%)=100×調質后活菌數或制粒后活菌數/調質前活菌數或制粒前活菌數。

1.4.2 顆粒硬度

樣品顆粒硬度的測定參照《飼料檢驗化驗員》中顆粒飼料硬度的測定方法檢測。

1.4.3 顆粒耐久性(PDI)

PDI檢測采用美國農業工程協會標準方法。

1.4.4 淀粉糊化度

淀粉糊化度檢測采用美國飼料工業界普遍采用的測定淀粉糊化度的簡易酶法測定。

1.4.5 生長性能

分別于試驗第21天與第42天結束前1天晚上開始控料，自由飲水，使試驗雞空腹24h，于第21天與第42天次日早上逐只稱重，以重復為單位計算各組試驗雞的平均體重。準確記錄每天耗料量，出現死雞時截料稱重，計算各階段總耗料量。

平均日采食量(ADFI)=總耗料量/(只數×天數);

平均日增重(ADG)=總增重/(只數×天數);

料重比(F/G)=總耗料量/總增重。

1.4.6 免疫器官指數

于42日齡每個重復隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，摘取脾臟和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算脾臟指數和法氏囊指數。

免疫器官指數(mg/g)=免疫器官重(mg)/活體重(g)。

1.4.7 盲腸微生物數量

于42日齡每個重復隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，無菌分離盲腸，取其內容物，采用平板培養計數法分別計數腸道乳酸菌、沙門氏菌和大腸桿菌數。菌群數量以每克腸道內容物所含細菌群落總數的對數［1g(CFU/g)］表示。

1.4.8 血漿生化指標

于42日齡每個重復隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，分別取血樣于促凝管中，離心，取血漿，采用試劑盒測定血漿尿素氮、總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白含量以及谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶活性等生化指標，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數據處理

試驗數據以平均值±標準差形式表示。所有數據用軟件SAS9.2進行單因素方差分析(oneway ANOVA)和復因子試驗統計分析，用Duncan氏法多重比較檢驗差異的顯著性，顯著水平為P＜0.05，極顯著水平為P＜0.01。

2結果與分析

2.1 飼料加工工藝對微生態制劑活性的影響

飼料加工工藝對微生態制劑活性的影響見表3。由表可知，肉雞生長前期飼料調質后枯草芽孢桿菌與包被乳酸菌的菌落總數和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，地衣芽孢桿菌的菌落總數和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05);肉雞生長前期飼料制粒后枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的菌落總數和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，包被乳酸菌的菌落總數和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05)。肉雞生長后期飼料調質后包被乳酸菌的菌落總數和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌落總數和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05);肉雞生長后期飼料制粒后包被乳酸菌的菌落總數和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌落總數和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05)。

3.2 飼料加工工藝對飼料顆粒質量的影響

隨著飼料配方的逐漸完善，飼料加工工藝對飼料質量有重要的影響。孫杰研究大料膨脹低溫制粒組的顆粒耐久性、淀粉糊化度與硬度顯著高于普通制粒組。本試驗研究表明肉雞生長前期、后期飼料制粒后ET組硬度、淀粉糊化度和顆粒耐久性顯著高于OT組，這是由于ET組大料經過85℃以上的調質溫度，使大料充分糊化，增加其糊化度，促使物料淀粉由緊密的β－淀粉轉化為糊化的α－淀粉，蛋白變性從而增加物料黏合性，并且經過低溫制粒后物料粘合更加緊密，因此硬度與顆粒耐久性較OT組更高。

3.3 飼料加工工藝和復合微生態制劑對肉雞生長性能的影響

復合微生態制劑自身具有促進動物生長，提高免疫力等功能。王虹玲等研究報道添加0.2%的復合微生態制劑和添加2.5%的黃氏多糖有助于改善肉雞的ADG與F/G。郝生宏等研究添加益生菌的試驗組與對照組相比，在第1周和第2周，生長性能出現不同程度下降，但第3周有所改觀。陳家祥等發現添加50mg/kg地衣芽胞桿菌組生長性能比對照組有所提高，但添加200mg/kg地衣芽抱桿菌組肉雞28日齡時F/G反而有所上升。本試驗結果表明復合微生態制劑在促進肉雞生長性能方面效果并不顯著，這可能是由于肉雞生長前期添加微生態制劑，微生態制劑誘導肉雛雞產生比較強烈的免疫反應，而免疫應激導致生長性能改善不顯著。同時，王昊等研究表明從總體生長性能來看，僅ADFI在添加16.92%膨化玉米組中顯著高于添加5.64%膨化玉米組，其他生長性能指標各組之間沒有顯著差異，飼料淀粉糊化度的提高對肉雞生長性能無顯著影響。本試驗研究表明，OT組肉雞生長性能優于ET組，這與王昊等研究不一致。這可能是由于肉雞自身特殊的生理特點，飼料淀粉糊化度升高，易于消化，食糜排空速度快，在體內營養吸收時間較短，從而不能使生長性能有所提升。

3.4 飼料加工工藝和復合微生態制劑對肉雞免疫器官指數和盲腸微生物數量的影響

免疫器官包括中樞免疫器官和外周免疫器官。脾臟是禽類最大的外周免疫器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫應答;法氏囊是禽類特有的體液免疫中樞器官，是B細胞分化發育的主要場所。中樞和外周免疫器官免疫功能的強弱決定禽類全身的免疫水平，免疫器官指數大小反映免疫系統成熟的快慢與機體免疫功能的強弱。程相朝等研究發現中藥免疫增強劑組法氏囊和脾臟等免疫器官指數高于空白對照組;王媚等研究肉雞35日齡時，飼糧添加微生態制劑的試驗組法氏囊指數和脾臟指數分別比對照組提高了40.12%和19.30%。由此可見微生態制劑可提升機體的免疫功能。徐海燕等發現肉雞33日齡時，飼喂倍利素的試驗組脾臟指數比對照組提高55.1%，差異顯著;26日齡時，試驗組法氏囊指數比對照組提高65.7%，差異顯著。本試驗研究發現，肉雞脾臟指數各組間差異不顯著，其中在相同加工工藝條件下，金霉素和復合微生態制劑添加量為0和200mg/kg時肉雞脾臟指數最高，這也說明了添加復合微生態制劑對可一定程度提升肉雞免疫能力;2種加工工藝對肉雞免疫器官指數影響差異不顯著，其中ET組效果略好于OT組，原因可能是由于ET工藝可以提高菌種保留率，從而提高免疫能力。

元娜等研究表明，在基礎飼糧中添加1.5g/kg復合微生態制劑，每克盲腸內容物中大腸桿菌數量較對照組降低37.51%，乳酸菌數量較對照組提高1.92%。胡順珍等研究表明，添加2.0%復合微生態制劑A和0.5%復合微生態制劑佐劑B時，肉雞盲腸乳酸菌數量顯著高于對照組，大腸桿菌數量顯著低于對照組。本試驗中，在相同加工工藝條件下，金霉素和復合微生態制劑添加量為300和200mg/kg組大腸桿菌和沙門氏菌數量最低，乳酸菌數量最高，這可能是由于抗生素自身也具有抑制腸道內有害菌調節腸道菌群的作用，在合理添加量內與微生態試劑合用，免疫效果更好;2種加工工藝對腸道維生素數量影響差異不顯著，其中ET組效果略好于OT組，這可能是由于ET組與OT組相比菌種活性略高，復合微生態制劑中芽孢桿菌可為乳酸菌生長創造厭氧環境，降低腸道內氧化還原電勢，抑制大腸桿菌與布氏桿菌等有害微生物的生長，調節腸道微生態平衡，從而起到抗菌防病的作用。

3.5 飼料加工工藝和復合微生態制劑對肉雞血漿生化指標的影響

血清中總蛋白、白蛋白與球蛋白可以反映動物機體的免疫功能狀態，血清中總蛋白反映了飼糧中粗蛋白質的消化利用率，其含量為白蛋白與球蛋白的總和。血清總蛋白及白蛋白含量的升高是蛋白質旺盛的表現，表明氨基酸、蛋白質的吸收利用率提高，機體肝臟的蛋白質合成代謝及組織蛋白質的沉積作用增強，進而提高動物生產性能;血清球蛋白由漿細胞分泌，可以反映動物機體的抵抗力水平。白球比反映脾臟的功能狀況，同時也是衡量機體免疫水平的一項指標。白球比值的下降說明機體特異性免疫應答水平提升，抗病力在增強。Abdulrahim等研究表明，益生菌具有提高血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白含量的功能;陳靜等試驗結果顯示，2.0%的復合微生態制劑顯著增加了14、21、28和35日齡肉雞血清總蛋白含量;謝為天等研究表明，復合微生態制劑能使試驗雞血清總蛋白含量上升，且白蛋白和球蛋白含量都有所增加，白球比值下降。本試驗研究表明，在相同加工工藝條件下，金霉素和復合微生態制劑添加量為300和200mg/kg組效果稍好，這可能是由于復合微生態試劑與適量抗生素兩者可使動物體內氨基酸代謝旺盛，蛋白質分解代謝下降，合成代謝加強，有利于蛋白質在體內的蓄積;2種加工工藝對肉雞血漿生化指標的影響差異不顯著，其中ET組效果稍好于OT組，這可能是由于ET組與OT組相比提高了飼料中微生態制劑的存活率。