摘要：研究了發酵稻草生產飼料蛋白的培養條件。在實驗室條件下，培養基的基本組成為稻草80g,麩皮20g,(NH)2SO42g，葡萄糖2g，KH2P041g。 原料:水為1 3, pH515~610,接種量10%，培養溫度28 °C~30 °C, 培養周期10d。產物分析結果表明，粗蛋白含量達到2215 %，粗纖維量為2518 %。

關鍵詞: 糙皮側耳，康氏木霉，飼料蛋白，稻草，培養條件

木質纖維素是植物秸稈的主要成分，是地球上數量最大的可再生性能源物質。利用微生物可把木質纖維材料轉化為飼料、化工原料等，具廣闊的應用前景。但秸稈中,由于木質素和纖維素成分緊密結合，木質素將纖維素緊緊包裹在里面，從而給纖維性成分的利用造成困難。因此，目前對秸稈轉化的研究重點集中在如何消除木質素對秸稈消化的抑制上中。一般來說，按常規的秸稈預處理的方法(高壓蒸汽處理、膨化、酸堿處理、氨化法等等)可以去掉50%左右的木質素并使纖維素成為非結晶態而易于被利用[2]。但這些方法用于工業化生產時成本太高，且容易造成再次污染。對木質素進行最有效降解的微生物是白腐真菌，屬于擔子菌屬3]。在這類微生物中存在一種木質素過氧化物酶(Ligninperoxidase)，正是這種酶對木質素的降解起了關鍵的作用。另據研究表明,用白腐真菌處理秸稈時，秸稈不需進行理化預處理4]。據此，我們以菌種，以二步固態發酵的形式，對發酵稻草生產飼料蛋白培養條件進行了研究,現報道如下。

1、材料與方法

111菌種

112培養基

11212液體培養基:平菇液體菌種培養基(g)一玉米粉 510, 葡萄糖015,蔗糖110,KH2PO4 0105。自然pH。1 X10'Pa 滅菌30min;麥芽汁培養基一8°BX 麥芽汁，自然pH。1 X10'Pa滅菌30min。

11213發酵培養基(g) 稻草粉8010，麩皮2010，(NH4)2SO4 210,葡萄糖210, pH515~

113培養方法

11311斜面菌種培養:挑取孢子接種到斜面，28 °C恒溫培養72h。

11312液體菌種培養:平菇液體菌種一用無菌吸管吸取5mL菌絲體懸浮液接入搖瓶，28 °C, 150r/ min振蕩培養3~5d。木霉液體菌種一斜面菌種 -活化→接種- -環至裝有.5mL麥芽汁的大試管中，28 °C、150r/ min搖床培養20~24h。

114發酵工藝

采用固體淺層二步發酵的方式。取250mL三角瓶，每瓶裝入發酵培養基10g ,1 X105 Pa滅菌20min,冷卻后以5 %接種量接入側耳液體菌種，28 °C恒溫靜止培養3~5c后，再以10 %接種量接入霉菌菌種，28 C繼續培養。發酵結束后，用烘箱對發酵產物進行干燥，溫度控制在60 °C左右，2~3h。當水分下降至12 %以下時，即可出料。

115 測定方法

水分的測定,粗蛋白的測定，粗纖維的測定和粗脂肪的測定均見文獻6。

2、結果與分析.

211 營養性因子對發酵產物粗蛋白含量的影響

21111主要基質的影響:設稻草粉麩皮分別為100 :0、90 :10、80 20、70 30、6040五種不同配比，分別秤入250mL三角瓶中，加入無機營養液，使固液比1 3,滅菌冷卻后接種。測產物的含水量和粗蛋白量。實驗表明，隨麩皮用量增加，發酵產物的粗蛋白含量逐漸遞增。從培養生長情況看，發現隨麩皮用量增加，菌株生長繁殖速度加快。因此，增加麩皮用量不僅可以縮短培養時間，而且能增加粗蛋白含量。但麩皮用量超過20%以后，粗蛋白的增加幅度減小，考慮到成本及實際應用，確定固體發酵培養基中稻草:麩皮為82進行以下的研究。.

21112無機氮源的影響:以麩皮與稻草粉為2 :8, 加入不同的無機氮源，分別是(NH4)2SO4、NH4C1、(NH)2HPO4、 NH4C0NH4、NaNO;、KNO3。使無機氮含量為210 % ,研究了不同無機氮源對發酵產物粗蛋白含量的影響，對照為不加無機氮。結果表明,以(NH)2SO4 作無機氮源，產物的粗蛋白含量比其他5種氮源都高，NH4C和(NH) 2HPO4其次，以尿素或NaNO3、KNO3作氮源時粗蛋白含量低，菌株生長差。這可能是由于菌株利用這些無機氮時,使培養物終pH中性偏堿之故。

212正交實驗優化發酵培養基在稻草:麩皮為8 2,培養基固液比為1 3的條件下,利用L9 (3)正交表設計實驗(表1所示),考察了(NH)2SO4、 KH2PO4、 葡萄糖、通氣量對粗蛋白產量的影響。其中通氣量以紗布層數控制。

結果表明，(NH4)2SO4 的極差最大，其次是葡萄糖和KHPO4,通氣量的極差最小，說明(NH4)2SO4 對粗蛋白產量的影響最大。為直觀地反映各因子對指標的影響，作出因子和實驗指標的關系如圖1。從圖1可看出，(NH4)2SO4極差最大，其圖形波動也最大;通氣量極差最小，其圖形波動最小。

各因素的主次順序為:主一→次A CB D。為進一步考察各因素對指標的影響，進行了方差分析,見表2。從方差分析看，(NH)2SO4 在99 %的置信度下對指標的影響高度顯著;葡萄糖在95 %的置信度下對指標的影響顯著。此結果與極差值的直觀分析一致，因此最佳組合的培養基為: (NH4)2SO4 2%~3%、葡萄糖2%、KH2PO4 1 %。

213培養基含水量的影響

固體發酵時，底物的含水量應控制在一個理想的水平。底物中最佳固液比取決于底物的性質、顆粒大小及底物的持水能力。我們試驗了固液比分別為110 :015、110 :110、110 :115、 110 210、110 310、110 410時對發酵蛋白產量的影響。

從結果看,木霉的生長需較高的含水量。固液比為1 3 (含水量約為76%)時，粗蛋白含量最高，但此后呈下降趨勢。因為底物水分過多時，使內部產生厭氧環境，不利于真菌的活動。

214培養基起始pH的影響

培養基的起始pH用1NHAI和10%NaOH調節，測試6種培養基酸堿度(pH510、515、610、 615、710、715)對粗蛋白產量的影響。

結果表明，培養基的起始pH515較適宜，此時產物粗蛋白含量達2315%;超過pH610將對菌種的生長產生較大的影響,例如pH715時，產物粗蛋白含量只有19 %。

215培養時間的影響

側耳菌絲長滿1/2培養基時，接種木霉菌種，在28 °C恒溫靜止培養時，培養時間實驗說明:培養物在24h前基本沒有生長，在24~72h生長迅速。在72h后生長又趨緩。實驗還表明，培養6d時產物的粗蛋白含量最高，達25101 %。繼續培養到7d以后，即使延長培養時間,粗蛋白產物量也不再增加。因此，培養時間應控制在3~6d之內。

216優化條件下菌株發酵稻草試驗及產物分析以二步固態發酵的方法試驗了糙皮側耳和康氏木霉混杏菌料乘莊:最忱邳養條件下發酵稻草產粗蛋白的情況，并進行了原料和產物豆丁

結論

通過發酵條件試驗，特別是發酵培養基的優化試驗，初步確定了菌株混合固體發酵稻草生產飼料蛋白的培養條件:培養基組分為稻草粉80g、麩皮20g、(NH4)2SO42g、 葡萄糖2g、KH2PO41g;原料冰=1 3, pH515~6l0,接種量10%，培養溫度28 °C~30 °C,培養周期10d。

本研究結果表明，選用優良微生物菌種在優化條件下混合固體發酵稻草生產飼料蛋白，具有原料廣泛、生產成本低、經濟效益高和生產工藝簡單等特點，既能有效利用資源，又能治理環境污染,變廢為寶,因而有重要的社會效益和經濟效益。

加強型EM菌青貯飼料專用發酵劑，真正的專業菌種更好的青貯飼料發酵劑，發酵成功率高速度快，香醇可口，牛羊喜吃，連豬雞都搶吃

  本品是一種以高濃度乳酸菌（300億/g）為主要原料加強型的專業青貯飼料發酵劑產品，適用于所有規模反芻動物養殖場使用，培養后可進行噴霧添加到青貯、微貯飼料固料中。與自然發酵或市場上一般EM菌比較，是為數不多的添加青貯飼料專業菌種：產丙酸丙酸桿菌、布氏乳桿菌、副干酪乳桿菌等的產品，具有：

  1.發酵速度快，青貯發酵不易失敗。

  2.增加分解秸稈纖維能力，縮短發酵時間，提高消化吸收率；

  3.增加特殊酶和增香甜菌種，能夠提高青貯料香甜度和營養；

  4.具有抑制青貯料持續產酸生態菌群設計，適口性佳；

  5.使用成本低廉，1包發酵2-3噸青貯秸稈飼料；

  6.使用本產品制作的青貯飼料和微貯飼料飼喂動物后，養殖場臭味、氨氣味等大幅度降低；

  7.動物排泄糞便中會殘留大量益生菌，糞便能夠自然加快發酵速度，形成良好益生環境。

  【產品簡介】

  大家都知道EM菌建議進行青貯飼料，比自然發酵的飼料速度快，但水劑EM菌產品因無法長時間保證復合酶制劑和乳酸菌等的活性而無法添加在產品中，因此發酵青貯、微貯飼料存在分解秸稈的纖維慢、存在持續產酸后期影響適口性等問題。

  本產品創新地采用固體EM菌設計，更方便運輸。未使用前菌種處于休眠狀態，在水中激活后快速對數繁殖（30℃環境下24小時后每毫升含活菌總數≥100億cfu）產生發酵功能，因為具有快速分解秸稈的纖維能力發酵速度極快，發酵出來的青貯飼料不僅更香醇、營養更豐富，且在密封狀態下可以保存1年以上不變質。

  牛羊等草食動物對發酵出來的青貯飼料非常喜吃，由于發酵的料非常香醇，還可以直接飼喂母豬、雞、鴨、鵝等，實踐證明都非常愛吃和很好的飼養效果，節約很多的飼料。動物食用后由于糞便中還存在大量的益生菌等，養殖場的臭味和氨氣等大大降低，糞便能夠自然快速發酵，形成生態養殖。

 【用法用量】

  將本產品1包（200克）與200克以上紅糖（數量越多效果越好，白糖、葡萄糖）溶于10-50公斤的水中（根據秸稈的含水量適當增減，低溫季節建議用35℃左右的溫水），24小時以上再用水稀釋或者直接噴入2-3噸秸稈青貯料中（可以一邊填料一邊噴入），將秸稈填入發酵池或容器中，一定要壓實并采用至少雙層膜密封頂部和采料的側面，保證密封性。

  一般24小時后就會明顯升溫，3天左右產生高溫，并有香醇的發酵味溢出，一般發酵20天以上才開封使用 ，如果用于喂豬、雞、鴨、鵝等建議發酵30天以上才使用。每次取用青貯料后，都要再次密封。

  由于本品中加入了特別的復合酶制劑，也可以對秸稈不需要鍘切，整條進行青貯發酵，只要壓實密封即可。發酵時間適當延長，達到株桿糜爛成微微泥狀即可使用。 

運用加強型EM菌青貯飼料發酵劑不鍘草青貯飼料現場

  用于喂豬、雞、鴨、鵝等的青貯飼料，開啟后要透氣一小時以上，以不超過30%的比例與其它飼料混合后飼喂 。  

  【包裝規格】200g /包，80包/箱，市場售價約15-20元/包。

  【貯  存】陰涼、干燥保存，由于高含量微生物制劑需要豐富的培養輔料，本產品中附帶了高級微生物激活后開口培養輔料，有可能會造成對產品的板結，但不會影響使用效果，只要將本產品溶于水中后即可使用。  

青貯飼料幾點核心操作提示：

  1.堆的高度和寬度太小，發酵和保存都比較難，不易長時間保存，建議每次發酵不低于3立方。

  2.一定要壓實，一邊噴入菌液一邊壓實，底部溢出的水不要管它，讓其流走即可。

  3.要至少采用2層薄膜覆蓋進行密封，最底部邊緣要將薄膜往墊料底部插入，最大限度地保證起密封。

  4.開封使用后，每次取料后要將開口處再次密封起來，確保不變質。

 【保 質 期】12個月（于通風、陰涼、干燥處存放）

聯系地址：廣西南寧市安吉路35號A棟26號（南寧市飼料獸藥禽苗市場內）

電話： 0771-2204816  3800156（兼傳真），微信公眾號：gxzn-99

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