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1 材料與方法

1.1 材 料

構樹葉：野外采集，曬干后粉碎。

纖維素酶（3000 IU/g）由湖南某生化有限公司生產，主要成分是中性纖維素酶。

蛋白酶（6000 IU/g）由某物制品有限公司生產，主要成分是木瓜蛋白酶。

復合酶由河北滄州某獸藥有限公司生產，主要成分是纖維素酶、蛋白酶、木聚糖酶、木質素酶和半纖維素酶等。

EM 原露由江西某生物技術有限公司生產，主要菌群是光合細菌、真菌和放線菌等。

三黃雞120日齡，平均體質量約1.2kg。

1.2 方 法

1.2.1 發(fā)酵構樹葉的制備

稱取200g 構樹葉12份，分4個試驗組，每組3個重復。分別添加0.1% 蛋白酶、0.1% 纖維素酶、0. 2% 復合酶和0.2%EM 菌種，并加入約60% 的水將構樹葉混勻，然后壓實且真空密封貯存在2000mL廣口瓶中，將發(fā)酵物置于37 ℃恒溫箱中發(fā)酵6d。發(fā)酵后用常規(guī)方法處理和保存樣品，并按照董寬虎的《飼草生產學》進行感官鑒定。

1.2.2 構樹葉營養(yǎng)成分的測定

水分、粗蛋白、粗灰分、粗纖維、粗脂肪、鈣和磷等按常規(guī)分析方法測定，每次測定重復3次，測定誤差參照《飼料分析及飼料質量檢測技術》介紹的方法進行。

1.2.3 代謝試驗

選取120 日齡健康的24只三黃雞，隨機分6組，每組4 個重復。1 組為對照組，2 組添加5 %的構樹葉粉，3 組添加5% 復合酶發(fā)酵的構樹葉粉，4 組添加5% 的蛋白酶發(fā)酵的構樹葉粉，5 組添加5% 的EM 原露發(fā)酵的構樹葉粉，6 組添加5% 的纖維素酶發(fā)酵的構樹葉粉。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS（13.0）軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計軟件中的一般線性模型（GLM）進行單因素方差分析，以LSD 法進行平均數的多重分析，顯著性水平定為P < 0.05。

2 結果與分析

2.1 發(fā)酵處理對構樹葉營養(yǎng)成分的影響

經發(fā)酵6d 后的構樹葉，外觀色澤黃綠，濕度適中，酒曲香味較濃，質地柔軟松散。分析其營養(yǎng)成分發(fā)現，經發(fā)酵處理后的構樹葉粗灰分、粗脂肪、粗蛋白和游離氨基酸含量均比對照組高，粗纖維含量則有不同程度的下降。

從表2 可見：經發(fā)酵處理的構樹葉粗灰分含量均有所增加，并顯著高于對照組，不同處理間差異不顯著；發(fā)酵處理的構樹葉粗脂肪含量增加，除了纖維素酶發(fā)酵組，其余各組均顯著高于對照組；經發(fā)酵處理的構樹葉粗纖維含量均有不同程度的下降，但與對照組相比，差異不顯著；其中，纖維素酶發(fā)酵的構樹葉粗纖維含量比對照組下降10.8%，發(fā)酵處理的構樹葉粗蛋白含量均顯著增加，且顯著高于對照組，用EM 發(fā)酵的構樹葉粗蛋白含量最高，比對照組相比提高13.6% ；游離氨基酸含量以蛋白酶發(fā)酵的試驗組最高，極顯著高于對照組，提高95.4 %，用纖維素酶和復合酶發(fā)酵的試驗組亦顯著高于構樹原葉，而用EM 發(fā)酵的試驗組與對照組相比，差異不顯著。

2.2 發(fā)酵構樹葉營養(yǎng)成分表觀消化率的比較

從表3 可見：三黃雞對各日糧的營養(yǎng)成分消化利用率無差異。粗蛋白、粗纖維、粗脂肪和磷的表觀消化率X-LBP-基礎日糧高于對照組和其他試驗組（P >0.05），鈣的表觀消化率略低于基礎日糧組，但高于其他試驗組（P >0.05）。靈山雞對纖維素酶發(fā)酵的構樹葉消化利用率較好。EM、復合酶或蛋白酶發(fā)酵處理亦能改善靈山雞對構樹葉營養(yǎng)物質的消化利用。

3 討 論

3.1 不同發(fā)酵處理對構樹葉營養(yǎng)成分的影響

構樹葉是較好的蛋白質飼料，但其蛋白質結構復雜，利用率不高，尤其是家禽和單胃動物的消化道難降解，如何能有效利用構樹葉資源并將其開發(fā)成新一代植物性蛋白飼料是當前急需解決的問題之一。構樹葉發(fā)酵處理主要是為了改變粗纖維、粗蛋白和游離氨基酸含量。試驗表明：發(fā)酵處理可部分降解構樹葉粗蛋白，增加粗蛋白和游離氨基酸含量，可提高構樹的利用價值。

經纖維素酶發(fā)酵的構樹葉，粗纖維含量最低，復合酶次之，蛋白酶處理則對粗纖維降解作用不大。復合酶、EM 原露和蛋白酶的發(fā)酵效果不如纖維素酶，可能與酶制劑的種類和活性有關。復合酶制劑通常比單一酶制劑效果好，但并不意味著復合酶制劑中酶的種類愈多愈好。一般情況下，添加以內源性消化酶為主的復合酶作用不明顯，添加以外源性酶為主的復合酶更有實際意義（鄧君明，2003）。

構樹葉的蛋白結構復雜，經發(fā)酵作用，游離氨基酸含量極顯著增加，尤以蛋白酶的作用最明顯。推測木瓜蛋白酶是一種含巰基（- SH）肽鏈內切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，對動植物蛋白、多肽或蛋白質有較強的水解能力，能產生更多的多肽或游離氨基酸（乙引，2000）；EM 原露是由多種微生物組成，發(fā)酵構樹葉時，這些微生物可大量繁殖，不但菌體蛋白含量增加，還能分泌多種酶，從而有效提高發(fā)酵構樹葉中的粗蛋白含量。

3.2 發(fā)酵構樹葉蛋白和纖維的表觀消化率

構樹葉利用率與粗纖維含量及蛋白質結構有關。粗纖維含量高不僅影響自身的消化，對其他營養(yǎng)成分的消化吸收也有不利影響，表現出抗營養(yǎng)作用；構樹葉蛋白結構復雜直接影響腸道吸收，導致單胃動物及家禽對營養(yǎng)物質的利用率降低。

單胃動物和家禽內源性纖維素酶不足或缺乏，則可降低纖維素消化利用率、添加纖維素酶可補充內源酶的不足，提高動物對粗纖維的利用率。同時還可改善消化道酶系組成、酶量及活性，促進小腸對營養(yǎng)物質及與細胞壁結合的礦物質的吸收。呂東海（2002）研究證實，家禽腸道微生物分解產生的可溶性非淀粉多糖能增加腸道食糜的黏度，導致食糜在消化道的滯留時間延長，進一步促進腸道后段微生物發(fā)酵，從而提高粗纖維的消化率。崔琰（2008）指出，纖維素及發(fā)酵產物的共同作用能刺激腸道蠕動，促進營養(yǎng)物質的消化和吸收。從試驗結果看，經纖維素酶發(fā)酵的構樹葉，纖維素和蛋白質的表觀消化率最高，EM處理組次之，說明構樹葉細胞壁可在纖維素酶或復合微生物作用下部分降解，從而促進腸道對非淀粉多糖的消化吸收，提高粗纖維的利用率；與此同時，構樹葉細胞壁部分裂解后，有利于改善腸道消化酶對蛋白質的分解作用，增加游離氨基酸含量，提高蛋白質的表觀消化率。

木瓜蛋白酶發(fā)酵雖然能增加構樹葉游離氨基酸含量，但作為一種巰基蛋白酶，其對大豆蛋白以外的植物蛋白水解能力較差（陳曉春，2005），加上未經過裂解細胞壁的屏障作用，單一木瓜蛋白酶發(fā)酵的構樹葉的蛋白質表觀消化率明顯低于纖維素酶組和EM 處理組；另外，由于構樹葉本身的粗纖維含量較高，蛋白酶并不能降低日糧粗纖維含量，粗纖維的抗營養(yǎng)作用也可使粗蛋白表觀消化率下降。

與基礎日糧組相比，添加5%構樹葉的LBP組粗蛋白、粗纖維、粗脂肪和干物質的表觀消化率均有一定程度的不良影響。發(fā)酵處理能有效提高靈山雞對構樹葉營養(yǎng)物質的消化吸收。

3.3 構樹葉的應用前景

我國飼料資源尤其是蛋白質飼料短缺的矛盾較為突出。構樹適應性廣且抗逆性強，構樹葉粗蛋白含量超過20%，作為一種非常規(guī)蛋白質飼料資源有著良好的開發(fā)應用前景。

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